最適な濃度を決定するにはどうすればよいですか?
誘導剤 IPTG (イソプロピル-ベータ-d-チオガラクトシド) の場合、濃度が高いほど優れています。最適な濃度は、特定の実験条件と望ましい誘導効果によって異なります。
一般に、IPTG の濃度は 0.1 ～ 1 mM の範囲で使用されます。濃度が低いほど、細胞増殖に対する悪影響が軽減され、標的タンパク質の過剰発現による細胞毒性が軽減されます。濃度が高いと過剰な細胞代謝負荷が生じ、細胞の増殖や発現効率に影響を与える可能性があります。
最適な濃度を決定する方法は、さまざまな濃度で IPTG 誘導試験を実施することにより、標的タンパク質の発現レベルを評価することです。小規模培養試験は、IPTG 濃度範囲 (例: 0.1 mM、0.5 mM、1 mM など) を使用して実行でき、標的タンパク質 (例: ウェスタンタンパク質) の発現レベルを検出することで、さまざまな濃度での発現効果を評価できます。ブロットまたは蛍光検出）。実験結果に従って、最も発現効果の高い濃度が最適濃度として選択されました。
さらに、関連文献や他の研究室の経験を参照して、同様の実験条件下で一般的に使用される IPTG 濃度範囲を理解し、実験のニーズに応じて最適化および調整することもできます。
最適な濃度は発現系、標的タンパク質、実験条件によって異なる場合があるため、ケースバイケースで最適化することが最善であることに注意することが重要です。
投稿日時: 2023 年 9 月 28 日