ジチオスレイトール (DTT) は、一般的に使用される還元剤であり、新しいグリーン添加剤としても知られています。2 つのメルカプタン基 (-SH) を持つ低分子有機化合物です。DTT はその還元特性と安定性により、生化学や分子生物学の実験で広く使用されています。
DTT の主な役割は、タンパク質やその他の生体分子のジスルフィド結合を還元することです。ジスルフィド結合はタンパク質のフォールディングと安定性の重要な部分ですが、還元可能なSDS-PAGE分析、タンパク質の組換えやフォールディングなどの特定の実験条件下では、タンパク質の空間構造を解明するにはジスルフィド結合を2つのチオール基に還元する必要があります。タンパク質。DTT はジスルフィド結合と反応してメルカプタン基に還元することができるため、タンパク質の空間構造が明らかになり、分析と操作が容易になります。
DTT は、酵素の活性と安定性を保護するためにも使用できます。一部の酵素触媒反応では、酵素の活性が酸化剤によって低下する場合があります。DTT は酸化剤と反応して酸化剤を無害な物質に還元し、それによって酵素の活性と安定性を保護します。
β-メルカプトエタノール (β-ME) などの従来の還元剤と比較して、DTT はより安全で安定した還元剤であると考えられています。水溶液中で安定であるだけでなく、高温および酸塩基条件下でも還元特性を維持します。
DTT の使用は比較的簡単です。一般に、DTT は適切なバッファーに溶解されてから実験系に追加されます。DTT の最適濃度は特定の実験に応じて決定する必要がありますが、通常は 0.1 ～ 1 mM の範囲で使用されます。濃度が低いほど、細胞増殖に対する悪影響が軽減され、標的タンパク質の過剰発現による細胞毒性が軽減されます。濃度が高いと過剰な細胞代謝負荷が生じ、細胞の増殖や発現効率に影響を与える可能性があります。
最適な濃度を決定する方法は、さまざまな濃度で IPTG 誘導試験を実施することにより、標的タンパク質の発現レベルを評価することです。小規模培養試験は、IPTG 濃度範囲 (例: 0.1 mM、0.5 mM、1 mM など) を使用して実行でき、標的タンパク質 (例: ウェスタンタンパク質) の発現レベルを検出することで、さまざまな濃度での発現効果を評価できます。ブロットまたは蛍光検出）。実験結果に従って、最も発現効果の高い濃度が最適濃度として選択されました。
さらに、関連文献や他の研究室の経験を参照して、同様の実験条件下で一般的に使用される IPTG 濃度範囲を理解し、実験のニーズに応じて最適化および調整することもできます。
最適な濃度は発現系、標的タンパク質、実験条件によって異なる場合があるため、ケースバイケースで最適化することが最善であることに注意することが重要です。
要約すると、DTT は、タンパク質やその他の生体分子のジスルフィド結合を還元し、酵素の活性と安定性を保護するために使用できる一般的に使用される還元剤です。生化学や分子生物学の実験で広く使用されています。
投稿日時: 2023 年 9 月 28 日